乳膠微球又稱聚苯乙烯微球、PS微球等。具有不同結構形態和分子量的單(dan)分散聚合物微球，由于在其表面引入不同官能團使其具有比表面大，吸附性強，力學性能好，方便回收利用等優點而在很多領域有廣闊的應用前景，其中聚苯乙烯微球(PS)是一種常見的高分子微球材料，隨即聚合物微球的制備與研究成為了高分子科學研究的新領域。聚苯乙烯微球具有高分子微球材料的通性，如粒徑小、比表面積大、吸附性強、分散性好、易于改性和修飾等。廣泛應用于生物化學、電化學檢測、催化劑、吸附劑、色譜填料、涂料等領域。

乳膠微球常見問題：

1.如何選擇乳膠微球得粒徑？

一般選擇粒(li)徑小(xiao)的乳(ru)(ru)膠微(wei)球，則需抗(kang)體(ti)量多，精密(mi)度與線(xian)性相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)較(jiao)(jiao)好：而選擇粒(li)徑大的乳(ru)(ru)膠微(wei)球，則所(suo)需抗(kang)體(ti)少，精密(mi)度與線(xian)性相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)較(jiao)(jiao)差，相(xiang)(xiang)對(dui)(dui)于小(xiao)粒(li)徑，大粒(li)徑靈敏度較(jiao)(jiao)好。

2.一般情況下微球濃度大概是多少？

整(zheng)個(ge)測定體系中，微(wei)球(qiu)濃度大約在0.01%左右(you)，更(geng)多的(de)是與試劑本身規定的(de)線性有(you)關系。

3.蛋白(抗體)與微球偶(ou)聯前，微球活化時間越長，效率越好？

需(xu)根據實驗(yan)情況(kuang)具體分析。如酸基微球(qiu)活化所需(xu)時間很短，一般以(yi)10-20 min為宜，長時間活化反(fan)而會降低(di)偶聯(lian)效率。

4.在使用離心方法偶聯乳膠微球，一般需多大得離心力？

離(li)心力(li)與所(suo)使用乳膠微(wei)球粒(li)徑(jing)有(you)關，一(yi)般粒(li)徑(jing)為70nm左右微(wei)球大(da)概需13000g/min離(li)心30 min以(yi)上(shang)，粒(li)徑(jing)越(yue)小(xiao)所(suo)需時間越(yue)長(chang)，離(li)心力(li)越(yue)大(da)。

5.蛋白無法吸附到微球上？

可通過多(duo)種方(fang)法改進。如加入(ru)(ru)更多(duo)的蛋白(bai)(bai)：去(qu)除(chu)微球表面活性劑，釋放其蛋白(bai)(bai)結(jie)合位點：引入(ru)(ru)中間物，將微球與蛋白(bai)(bai)相(xiang)連；改變緩沖液等。

6.標記時加入了大量蛋白，但是仍然無活性？

可嘗(chang)試改變蛋白(bai)(bai)(bai)加入(ru)量，從而改變蛋白(bai)(bai)(bai)與微(wei)球結(jie)合(he)的空間(jian)構象；使用表位稀釋物(wu)，占據(ju)微(wei)球上(shang)的部分蛋白(bai)(bai)(bai)結(jie)合(he)位點，防(fang)止(zhi)蛋白(bai)(bai)(bai)靠的太(tai)近。

7.乳膠微球與抗體偶聯后，當時沒有發現凝集，但隔夜后發現有凝集，這就是什么原因？如何控制與避免？

這種情況一般是偶聯效率低造成。當體系中蛋白不足或其它原因，使微球表面在交聯后還空出許多反應基團時，這些基團又可以與相連微球上蛋白反應，結果發生聚集。可以加一些阻斷劑BSA等解決：另外，也可提高微球交聯率。過一段時間后才出現凝集是因為微球偶聯蛋白后，相互之間由于攜帶同種電荷關系，比較穩定(所以能以膠體樣存在)，只有當偶爾相互碰撞，遇上彼此反應基團時才能結合。

8.乳膠微球自凝現象如何控制與避免？

乳膠(jiao)微(wei)球自凝現象與許多因素有關，如高電(dian)解質濃度、表面價電(dian)荷被(bei)中合、或置于某些(xie)不(bu)利(li)環境(血冷凍時)。

1)當電解(jie)質濃(nong)度升高(gao)到某一水(shui)平(ping)，使(shi)(shi)得表面負電荷被掩蔽，乳膠微球之間發生(sheng)接觸便(bian)產生(sheng)凝集，故(gu)高(gao)離(li)子強度緩(huan)沖溶液(ye)(ye)不可使(shi)(shi)用，緩(huan)沖溶液(ye)(ye)濃(nong)度一般不要(yao)超(chao)過(guo)50mM。

2)對負電(dian)荷(he)乳膠微(wei)球，不能(neng)使用正電(dian)荷(he)得(de)緩沖溶液(ye)(如Tris緩沖溶液(ye))。

3)在長期貯藏時，懸浮(fu)介質pH應至少保持在比乳膠(jiao)微球表面基團pKa值(zhi)高1-2 pH單(dan)位。

4)高濃(nong)度(du)乳(ru)膠微(wei)球(qiu)容易促(cu)使(shi)膠體(ti)不穩定，故(gu)乳(ru)膠微(wei)球(qiu)濃(nong)度(du)以低(di)濃(nong)度(du)為宜(yi)，乳(ru)膠微(wei)球(qiu)也(ye)不能受冷凍，否則會凝(ning)集。

5)偶(ou)聯(lian)時，將(jiang)微球加入蛋白(bai)液中，而不是將(jiang)蛋白(bai)加入微球中。

6)偶聯時，振蕩(dang)加快反應

總之(zhi)，其原則(ze)是在(zai)(zai)微球與蛋(dan)白偶聯(lian)前，減(jian)少其在(zai)(zai)高離(li)子強度下與其它微球接觸的機會。

9.為什么抗體偶聯至基微球后，即時檢測效果很好，但置于37℃2天后，抗體活性會下降？

1)乳(ru)膠微(wei)球(qiu)含(han)有(you)表面活性(xing)劑，導致(zhi)乳(ru)膠微(wei)球(qiu)自身(shen)出現自凝現象，可以通過顯微(wei)鏡進行(xing)觀察。可偶(ou)聯(lian)(lian)之(zhi)前進行(xing)清(qing)洗，避免偶(ou)聯(lian)(lian)乳(ru)膠微(wei)球(qiu)聚集。

2)如果通過共價反應結合的抗(kang)體(ti)活性(xing)失活，常見原因是(shi)抗(kang)體(ti)質(zhi)量差(cha)或試(shi)(shi)劑過期所致，可檢查試(shi)(shi)劑是(shi)否(fou)被污染，試(shi)(shi)劑中是(shi)否(fou)出現自由流(liu)動白色(se)粉(fen)末、持續性(xing)團塊等來判斷。

10.乳膠微球偶聯抗體后與抗原進行反應，效果不明顯是什么原因所致？

1)抗(kang)原與抗(kang)體不匹配：

2)包被得(de)抗體量下足：

3)抗(kang)體(ti)使用量雖多，但偶聯效率低(di)。

11.如(ru)何(he)儲(chu)存使乳(ru)膠微球穩定性高？

1)降(jiang)低儲存溫度到2~8℃；

2)降低儲存液中的(de)封閉劑(ji)濃度，防止抗體被替換：

3)確認儲存液中無(wu)能與抗(kang)體競爭的(de)雜質，防止長時(shi)間取代抗(kang)體：

4)使用低濃度緩沖液儲存，如MOPSO、MES、HEPES等。